称取样品约1.0 g（精确至0.001 g），置于10 mL比色管中，加入1mL饱和氯化钠溶液，涡旋30s后加入乙腈，定容至刻度，涡旋30 s，超声提取30 min，涡旋1 min，4500 rpm离心5 min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液备用。
5.2 液相色谱-三重四极杆质谱联用分析条件
5.2.1 色谱条件
色谱柱： 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 （3.5 μm， 2.1*150mm），螺内酯和坎利酮两个化合物色谱峰分离度要求大于1.5。
流动相：溶液A：0.2%甲酸水，溶液B：甲醇（含0.2%甲酸），梯度程序见表2
表2 流动相的梯度程序
时间（min）
| 溶液A（%）
| 溶液B（%）
|
0
| 95
| 5
|
2
| 75
| 25
|
4
| 45
| 55
|
11
| 20
| 80
|
18
| 10
| 90
|
流速：0.3 mL/min；
柱温：30 ℃；
进样量：5 μL。
5.2.2 质谱参考条件
离子源： 电喷雾离子源（ESI源）；
监测模式： 正离子监测模式； 监测离子对及相关电压参数设定见表3
喷雾压力： 40 psi；
干燥气流速： 8 L/min；
干燥气温度： 325 ℃；
毛细管电压： 4000 V；
0～3.5 min：不进入质谱仪分析， 3.5 ～18 min：进入质谱仪分析。
表3 三重四极杆离子对及相关电压参数设定表
编号
| 物质名称
| 母离子（m/z）
| Frag.（V）
| 子离子（m/z）
| CE（V）
|
1
| 米诺地尔
| 210．0
| 110
| 193.2
| 10
|
|
|
| 110
| 164.1*
| 25
|
2
| 氢化可的松
| 363.1
| 125
| 327
| 10
|
|
|
| 125
| 121*
| 25
|
3
| 螺内酯
| 341.1
| 147
| 107.1*
| 35
|
|
|
| 165
| 90.9
| 65
|
4
| 雌酮
| 271.2
| 105
| 253.1*
| 5
|
|
|
| 105
| 132.8
| 22
|
5
| 坎利酮
| 341.1
| 147
| 107.1*
| 35
|
|
|
| 165
| 90.9
| 65
|
6
| 醋酸曲安奈德
| 477.1
| 100
| 457.2*
| 5
|
|
|
| 100
| 439.1
| 10
|
7
| 黄体酮
| 315.2
| 140
| 109
| 25
|
|
|
| 140
| 97*
| 23
|
